超微粉碎技术是近年来一项新技术。经超微粉碎后的中药材比表面积增加,有利于内容物溶出,便于有效成分的提取。
穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponiea Makinor的根状茎,具有舒筋活络、祛风止痛的功能。
穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL一2的产生。
穿山龙主含有薯蓣皂苷1.5% 一2.6%,水解后生成薯蓣皂苷元,是合成激素的主要原料。超声提取可提高皂苷的提取率,但穿山龙质地坚硬,成分溶出受饮片规格影响。
本试验对穿山龙经超微粉碎及穿山龙细粉、粗粉、饮片中薯蓣皂苷的溶出率进行了对比,报道如下:
1、仪器与试药
SZM系列超微粉碎机(泰安正信科技有限责任公司);
超声波清洗器【(33±2)kHz,(250±70)W,中国船舶工业总公司第七研究院第七二六研究所】;
高效液相色谱仪
SPD—MIOAvp二极管阵列检测器
Shimadzu CLASS—VP色谱工作站
穿山龙药材购自陕西省药材公司,经鉴定为穿龙薯蓣Dioscorea
nipponica Makinor的根状茎。薯蓣皂苷元对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号为1539—200001);乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯,水为双蒸水。
2、方法与结果
2.1含量测定:
2.1.1色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:ltypersilBDSCl$柱(150mm×4.6 Him,5 m);流动相:
乙腈一水(95:5);温度:35℃ ;流速:1.0mL/min,进样量:10此;检测波长:203 nm。理论塔板数不低于8 000。
2.1.2对照品溶液制备
称取薯蓣皂苷元对照品5mg,置25ml量瓶中,加乙腈约20ml,加热使溶解,放冷至室温,加乙腈至刻度,摇匀。
2.1.3检测波长确定
在200—370 am波长范围对对照品进行吸收扫描,薯蓣皂苷元在195 hill波长处有最大吸收,在此波长处进样供试品溶液,基线噪音较大,在203/1111波长处进样供试品溶液,基线平稳,因此确定测定波长为203 nm。
2.1.4方法学考察
线性关系考察
2.1.5样品含量测定
分别进样对照品溶液及供试品溶液各10L,根据峰面积比值计算含量。
2.2提取方法考察
取穿山龙,烘干,分别粉碎为超微粉、细粉、粗粉、饮片4种规格,分别称取以上4种样品5g,每种规格取4份,精密称定,分别置100ml圆底烧瓶中,加乙醇50ml,称重,分别用超声30rain、浸泡30min、浸泡12 h、水浴加热回流30 min 4种方法提取;
放冷至室温,称重,用乙醇补充损失的质量,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml,置100ml圆底烧瓶中,加乙醇50ml,加盐酸8ml,水浴上回流2 h;放冷至室温,移入分液漏斗中,用少量石油醚(60~90℃ )洗涤圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗中。用石油醚提取3次,每次40ml,合并石油醚,水浴上蒸干,残渣精密加乙腈10ml,称定质量,微热使溶解,放冷至室温,用乙腈补充减失的质量,摇匀,过0.45m微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。
按2.1项下方法测定薯蓣皂苷元含量,计算薯蓣皂苷元得率。可见,4种规格的穿山龙薯蓣皂苷提取率差异较大:
经过超微粉碎机粉碎的超微粉无论采用何种提取方法均较其他3种规格提取率高;
微粉用乙醇冷浸30 rain可浸提出89.5% 的薯蓣皂苷,冷浸30rain较细粉回流提取30min高出29.7% ,较细粉超声30min高出8.5% ,微粉超声30min较细粉超声30min高17.5%。
结果
相同提取条件下,穿山龙粉碎度越细,薯蓣皂苷提取率越高,细胞级超微粉碎技术工艺可明显提高穿山龙薯蓣皂苷提取率。
超微粉与细粉采用超声30 min提取较加热回流30 min提取的薯蓣皂苷提取率较高,并且超声提取节约能源,操作简便,适合于生产。
SZM超微粉碎机是中药超微粉碎机的最佳选择